Το μονοπάτι της 3-κινάσης των φωσφοϊνοσιτιδίων (PI3K, phosphoinositide 3-kinase) αποτελεί ένα από τα πιο συχνά απορρυθμισμένα μονοπάτια κυτταρικής σηματοδότησης σε παθολογικές καταστάσεις όπως ο καρκίνος. Η 3-φωσφατάση των φωσφοϊνοσιτιδίων PTEN (Phosphatase and TENsin homolog) αποτελεί σημαντικό ρυθμιστή αυτού του μονοπατιού: είναι πρωτεΐνη στην οποία εκφράζεται ένα ογκοκατασταλτικό γονίδιο που συχνά απενεργοποιείται σε καρκίνους. Επιπλέον, σωματικές ή γενετικές μεταλλάξεις στην PTEN προκαλούν νευροαναπτυξιακά σύνδρομα που χαρακτηρίζονται από μορφολογικές και λειτουργικές δυσλειτουργίες σε νευρώνες. Σε επίπεδο οργανισμού τέτοιες δυσλειτουργίες μεταφράζονται σε μαθησιακές/γνωσιακές δυσκολίες και σε αυτισμό, μεταξύ άλλων. Σε αντίθεση, απενεργοποίηση της PTEN μετά από αξονικό τραυματισμό ώριμων νευρικών κυττάρων οδηγεί στην επιτάχυνση της αναγέννησης των νευραξόνων και αποκατάσταση της νευρικής συνδεσιμότητας. Στο εργαστήριο μελετάμε τη δράση της φωσφατάσης PTEN στην νευρική κυτταρική μορφολογία, διαφοροποίηση και λειτουργία. Μελετάμε επίσης τo ρόλο που παίζουν στη ρύθμιση του μονοπατιού της PI3K σε αναπτυσσόμενους και ώριμους νευρώνες συγκεκριμένα σύμπλοκα της PTEN με άλλες πρωτεΐνες. Προς αυτή την κατεύθυνση, έχουμε αναπτύξει ένα μοντέλο ρυθμιζόμενης γενετικής τροποποίησης βλαστικών κυττάρων καθώς και πρωτόκολλα διαφοροποίησης των κυττάρων αυτών σε ώριμους κινητικούς νευρώνες και μαγνητικής απομόνωσης αμιγών πληθυσμών. Η τεχνική στηρίζεται στην επαγωγή κατά βούληση της έκφρασης διαγονιδίων σε διαφορετικά στάδια της διαφοροποίησης μέσω του συστήματος τετρακυκλίνης. Ταυτόχρονα, αναπτύσσουμε μεθόδους μέτρησης και ποσοτικοποίησης της σηματοδότησης μέσω του μονοπατιού των PI3K/PTEN με έμφαση στην πρωτεϊνικές κινάσες Αkt. Χρησιμοποιώντας μια μέθοδο ανάλυσης της φωσφορυλίωσης πρωτεϊνών μέσω τριχοειδούς ισοηλεκτρικής εστίασης και με κατάλληλα αντισώματα, μπορούμε να ποσοτικοποιήσουμε μικρές αυξομειώσεις της φωσφορυλίωσης σε συγκεκριμένα αμινοξέα των ισομορφών της Akt μετά από αναστολή της PI3K ή υπερέκφραση της PTEN με ακρίβεια ανώτερη από αυτή παραδοσιακών τεχνικών όπως η ανοσοαποτύπωση.
Ομιλητής: Γ. Λεονταρίτης
Εργαστήριο Φαρμακολογίας, Ιατρική Σχολή, Πανεπιστήμιο Ιωαννίνων και MRC Centre for Developmental Neurobiology, King's College London
Ώρα: Πέμπτη, 30 Μαΐου 2013, 11:00